植物组织原位杂交来电垂询「思特进」

原位杂交技术基本原理

原位杂交技术的基本原理是利用-分子单链之间有互补的碱基序列，将有放6射性或非放6射性的外源-(即探针)与组织、细胞或染色体上待测dna或rna互补配对，结合成专一的-杂交分子，经一定的检测手段将待测-在组织、细胞或染色体上的位置显示出来。

为显示特定的-序列必须具备3个重要条件：组织、细胞或染色体的固定、具有能与特定片段互补的核苷酸序列(即探针)、有与探针结合的标记物。

杂交液中的阳离子浓度通过静电排斥作用影响了杂交体之间的链稳定性，较高的盐浓度将增加杂交体的稳定性。大于0.4m的na离子浓度，对tm值、双链复性速率的影响不大，但随着na离子浓度的降低，将-影响tm值和双链复性速率。

有2机溶2剂-胺的作用是降低dna-dna和dna-rna等双链体的解链温度。通常dna需要在0.1~0.2m na+ 90~100℃的条件下变性，那么应用于原位杂交，样品必须在65~75℃的条件下进-时间变性，这将导致样品形态学的破坏。50%-胺的应用能将杂交温度降至30~45℃。

-葡聚糖具有很强的水合性，高浓度的-葡聚糖会使得-分子无法获得周边亲水环境，增加了探针浓度，加快杂交反应速率。