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 原位杂-及的步骤:玻片的准备和样品固定,细胞或组织的预渗透处理,靶dna变性dna原位杂交,探针制备,原位杂交过程,杂交后洗涤,探针显色检测。

  玻片的准备和样品固定

  对于染色体涂片,1:1的-/醚处理的载玻片已能符合要求。对于组织切片的原位杂交,为了在实验过程中不丢失组织样品,可使用多聚赖氨酸或铬矾明胶包被的载玻片。

  样品的固定步骤是为了保持样品的原有形态学。样品固定是原位杂交中的步骤,从化学反应角度来看,固定剂的使用和选择对后续杂交的影响不会太大,因为-杂交的功能分子基团被-包裹在dna双螺旋结构中,而交联剂的使用对rna基本没有影响。对于染色体涂片,常使用/固定;石蜡包埋的组织切片用固定。冷冻切片可通过在4%的-中固定30min,或使用bouin固定剂。


在进行研究前,确定应用的探针类型。不同探针类型的优劣势请见上文描述。dna探针的制备包括了前期的dn-段分离纯化或cdna的和酶促探针标记,可选随机引物标记法和缺口平移法等。rna探针的制备包括了转录载体和转录法探针标记。寡核苷酸探针的制备要求先获得合成的寡核苷酸片段,再进行末端标记或加尾法探针标记。但无论采用何种标记探针及标记方法,对探针标记效果需进行终的评估,并准确计算探针浓度。


1、致模因素对动物模型的影响

应明确研究目的,清楚相应人类-的发生、--和发病机制,熟悉致病因素对动物所产生的--和发病情况,致病因素的剂量。

2、动物因素对动物模型的影响  

品种、品系、年龄体重、性别、生理状态等

3、实验技术因素对动物模型的影响

实验季节、昼夜过程、-、手术技巧、实验给药、对照组的影响等。

4、环境因素和营养因素对动物模型的影响

模型的成败往往与环境的改变有密切关系。拥挤、饮食改变、过度光照、噪音、屏障系统的破坏等,任何一项被忽视都可能给模型动物带来-影响。





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