原位杂交-「在线咨询」

原位杂交技术可应用于什么方面

1.细胞特-mrna转录的定位　可用于基因图谱、基因表达和基因组进化的研究。

2.感6染组织中-dna/rna的检测和定位，如eb-mrna、人类乳3头状瘤-和巨细胞-dna的检测。

3.癌基因、抑癌基因及各种功能基因在转录水平的表达及其变化的检测。

４.基因在染色体上的定位。

5.检测染色体的变化，如染色体数量异常和染色体易位等。

6.分裂间期细胞遗传学的研究，如遗传病的产前诊断和某些遗传

原位杂交(in situ hybridization)也叫原位杂交组化(in situ hybridization histochemistry, ishh)，是一种固相分子杂交的方法，bai它是用标记的dna或rna为探针，在原位检测组织或细胞内特定-序列的方法。探针的种类按所带标记物可分为同位素标记探针和非同位素标记探针两大类。常用的同位素标记物有3h、35s、125i和32p，非同位素标记物中目前很常用的有生物素、地高6辛和荧光素三种。探针的种类按-性质不同又可分为dna探针、cdna探针、rna探针和合成寡核苷酸探针。

原位杂交术可在原位检测细胞合成某种多肽或蛋白质的基因表达，有-的敏感性和特-，已成为细胞生物学、分子生物学研究的重要手段。

杂交液中的阳离子浓度通过静电排斥作用影响了杂交体之间的链稳定性，较高的盐浓度将增加杂交体的稳定性。大于0.4m的na离子浓度，对tm值、双链复性速率的影响不大，但随着na离子浓度的降低，将-影响tm值和双链复性速率。

有2机溶2剂-胺的作用是降低dna-dna和dna-rna等双链体的解链温度。通常dna需要在0.1~0.2m na+ 90~100℃的条件下变性，那么应用于原位杂交，样品必须在65~75℃的条件下进-时间变性，这将导致样品形态学的破坏。50%-胺的应用能将杂交温度降至30~45℃。

-葡聚糖具有很强的水合性，高浓度的-葡聚糖会使得-分子无法获得周边亲水环境，增加了探针浓度，加快杂交反应速率。